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聚丙烯酰胺凝胶常规银染方法

来源:兴茂水处理 时间:2020-03-06 点击次数:

聚丙烯酰胺凝胶常规银染方法(1) 电泳结束后切断电源, 从电泳槽中倒出缓冲液, 然后取下胶板, 将凝胶从玻板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中, 用蒸馏水漂洗2次。(2) 固定凝胶: 向盘中加入固定液(10%的乙醇)浸没凝胶, 放在摇床上轻轻摇20 min, 倒去固定液, 用蒸馏水漂洗2次。(3) 凝胶氧化: 然后加入1%的硝酸氧化5 min, 硝酸回收, 用蒸馏水漂洗2次。(4) 银染凝胶: 加入0.1%的硝酸银染色液浸没凝胶, 放在摇床闭光轻轻摇30 min, 倒去液体, 蒸馏水漂洗2次。(5) 凝胶显影: 向瓷盘中加入2%的碳酸钠(0.1~0.2克硫代硫酸钠, 500 mL溶液加750 μL)显色液浸没凝胶, 边摇边观察, 直到凝胶上显现清晰的电泳条带。(6) 终止显影: 条带清晰后迅速倒出显色液, 快加入4%的乙酸停显液浸没凝胶, 停止显色反应。(7) 停显后, 加入蒸馏水浸没凝胶。(8) 凝胶摄影: 用数码相机对凝胶进行照相。1.4.2 聚丙烯酰胺凝胶常规银染方法二(1) 电泳结束后切断电源, 从电泳槽中倒出缓冲液, 然后取下胶板, 将凝胶从玻板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中, 用蒸馏水漂洗2次。(2) 固定: 加入固定液(1%的冰醋酸、10%的无水乙醇)进行固定30 min, 然后用蒸馏水漂洗2次。(3) 银染: 加入染色液(0.2%AgNO31%的冰醋酸、10%的无水乙醇)进行银染20 min, 然后用蒸馏水漂洗2次。(4) 显影: 加入显影液(3%的无水NaOH, 200 mL溶液加1 mL甲醛)进行显色。(5) 凝胶摄影: 用数码相机对凝胶进行照相。